IVF工作台在体外受精实验的作用

ART生殖辅助产品 IVF工作台在体外受精实验的作用

体外影响卵母细胞和胚胎的外部因素

在所有处理的卵母细胞/胚胎,它们必须受到从物理/化学变化的保护,特别是:

  • 温度的变化
  • 培养基的渗透压和pH值
  • 空气质量

 

A. 温度

 

  • 在发育过程中的卵母细胞(雌性生殖细胞),特别是对温度的改变是极其敏感的。
  • 温度的变化会影响跨膜运输、细胞内许多代谢过程。
  • 人类的卵母细胞和胚胎必须在一个稳定的37°C中紧密进行。
  • 温度也影响样品的PH值。
  • 蒸发会影响样品的PH值。
  • 一个显着,但认识不足,混淆方面的温度控制,尤其在显微镜下观察培养皿内的卵母细胞和胚胎,不允许培养皿直显微镜载有接触,两者之间必须拥有空气间隙(见图)。因为空气是热的不良导体,该空气间隙大大降低疗效的加热台(或附着或内置的显微镜,或是加热的安全柜内阁工作表面,使培养基的温度低于设定的加热表面温度。

 

B. 培养基容积渗透克分子浓度和pH值

用于人类的体外受精(IVF)的培养基比最近几年有明显的演变与日益广泛使用的“序贯培养基”包括一系列的培养基设计,从卵受精和卵裂囊胚的每个阶段提供优化的专业技术支援。

所有培养基的正确使用都需要特殊的环境,至少在二氧化碳的环境中。

此外,现在已经证实人类胚胎在正常空气中氧气张力降低的环境下,显示了更好的培养和植入潜力。然而,二氧化碳和氧气浓度(体积百分比)和压力之间有很大的混乱。首先,在海拔较高的地方,不仅是大气压力下降,但相对比例的氧和氮(和其他轻微的气体)也会发生改变:例如,鉴于在海平面20.95% 的氧气浓度,在海拔1000米只有18.55% 的氧气浓度和在1600米(例如丹佛)那里是只有17.2%的氧气浓度。同样的变化也会影响二氧化碳,所以,如果要在海平面实现25mm碳酸氢盐溶液pH7.3,6.0 %的二氧化碳是需要的,根据Handerson-Hasselbach方程否则pH将移位和碳酸氢根离子将会丢失,直到溶液达到新的平衡点。但在海平面1600米以上,几乎7.5%的二氧化碳需要,方能达到正确的分压(二氧化碳),以保持在溶液中的碳酸氢根离子和7.3的pH值。

用重碳酸盐培养基的一个主要问题是,它们需要很长的时间才能达到平衡。最近的研究[ 4 ]已经表明,将50 ul液培养基下油气后去除二氧化碳培养箱中取出,在2分钟后pH值将转移到7.45;更换二氧化碳培养箱中的培养基会采取35分钟重新平衡pH值(培养皿中含有5ml培养基只需大约15分钟)。这些差异是由于相对平衡中的空气和培养基大小不同的二氧化碳含量;以及培养箱之间的环境和部分抽气培养基的二氧化碳含量。

如果培养基暴露在不蒸气饱和的空气中,水蒸气就会从培养基中流失早造成容积渗透克分子浓度的增加。在温暖的温度下蒸发也较高。覆盖于油的培养基有助于解决这一问题,在卵母细胞提取的培养皿不含任何覆盖的油,否则将大大将整个过程复杂化。

 

C. 空气质量

因为他们的高代谢和细胞分裂率,胚胎对有毒化学物质是高度敏感的,从而使体外受精 /生育辅助实验室和程序工作室,特别是高风险区挥发性有机化合物(VOCs)和其他空气污染物。

HEPA高效空气过滤器(高效微粒空气)被误为截留气态有机和无机分子。高效,顾名思义,是用于去除空气中的颗粒物(标准针对于0.3微米的粒子,拥有99.97%的截流效率),而不是低分子量的气体分子。